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PCR 和 qPCR 有什么区别?

来源: | 发布日期:2023-12-13 | 浏览量:1

PCR 和 qPCR 都是用于扩增 DNA 特定片段的聚合酶链式反应技术。两者之间的主要区别在于 qPCR 是实时方法,而PCR 不是。

这意味着通过 qPCR,您可以实时监控目标 DNA 的扩增情况。本指南将向您介绍这两种方法并解释它们之间的主要区别。

什么是PCR?

PCR(聚合酶链式反应)是一种实验室技术,由 Kary Mullis 在 20 世纪 80 年代开发,如今用于从少量 DNA 产生大量 DNA。

PCR 通常是其他过程中使用的步骤,例如 DNA 测序、病原体检测和凝胶电泳。PCR是一种重要的诊断技术,常用于病毒学、微生物学、寄生虫学、真菌学和牙科等领域。  

聚合酶链式反应 (PCR) 是一种用于制备 DNA 特定片段的多个副本的方法。这个过程从少量模板 DNA 开始,然后通过称为聚合酶的酶进行复制。 通过重复加热和冷却循环可以增加复制的数量,这会分离 DNA 链,以便它们可以再次复制。

PCR 的最终产物是目标 DNA 序列的大量相同副本。然后该产品可用于进一步分析,例如测序或 Southern 印迹。 PCR 还可用于从 mRNA 模板分子制备 cDNA。


什么是 qPCR(实时 PCR)?

定量聚合酶链式反应(qPCR 或定量 PCR)与 PCR 非常相似,但它还允许您量化样品中存在的目标 DNA 的量。qPCR 涉及在扩增过程中添加与目标 DNA 结合的荧光染料或探针。 当这些探针被激光激发时,它们会发出不同波长的光。

通过测量每个波长发出的光,您可以确定在扩增开始之前样品中存在多少目标 DNA。qPCR 还可用于通过测量荧光随时间的增加来实时监测扩增进度。


什么是逆转录PCR?

逆转录 PCR (RT-PCR) 是一种 PCR,用于从 mRNA 模板分子制备 cDNA。RT-PCR 通常用于检测和定量 RNA 病毒,例如 HIV 和丙型肝炎。

要进行 RT-PCR,您首先需要使用逆转录酶将 mRNA 模板逆转录为 cDNA。然后您可以使用 PCR 来扩增您的目标 cDNA 序列。 RT-PCR 是一种非常灵敏的方法,可用于检测样品中极低水平的 RNA 病毒。

qPCR 具有测量基因表达的能力。在基因表达中,当读取一段 DNA 时,就会合成 mRNA,然后使用 mRNA 来生产蛋白质。

在逆转录过程中,逆转录酶可用于创建互补 DNA (cDNA),这将是所研究的 RNA 的副本。然后对 cDNA 进行 qPCR,以准确测量产生的量。

RNA 可用于 PCR 和 qPCR,如果 RNA 用于 PCR,则称为 RT-PCR,如果 RNA 用于 qPCR,则称为 qRT-PCR。  


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PCR 和 qPCR 之间的差异

PCR 和 qPCR 之间的主要区别在于 qPCR 是实时方法,而 PCR 不是。这意味着通过 qPCR,您可以实时监控目标 DNA 的扩增情况。

两种方法之间的另一个区别是 qPCR 需要使用荧光染料或探针,而 PCR 则不需要。这些探针可让您定量样品中存在的目标 DNA 的量。

  • PCR 通常用于扩增 DNA 以进行测序或其他下游应用。
  • qPCR 通常用于检测和定量 RNA 病毒。
  • RT-PCR 是 PCR 的一种,用于从 mRNA 模板分子制备 cDNA。

PCR 和 qPCR 的应用和用途

聚合酶链式反应

PCR 是一个相对简单的过程,可以检测DNA 是否存在。PCR 应用于许多不同的领域,包括法医学、医学和生物技术。 它经常用于扩增小片段 DNA 以进行测序或其他下游应用。

PCR 还可用于从 mRNA 模板分子制备 cDNA

定量PCR

qPCR 提供测量反应速率的实时数据,提供有关任何给定时间样本中存在的 DNA 数量的 信息,本质上,它能够测量基因表达速率。

在分子生物学中,这有助于理解蛋白质合成,从而有助于理解健康和疾病的生物途径。实时或 qPCR 可用于检测基因表达、病原体和 RNA 的存在和数量,以及验证 DNA 微阵列结果和环境应用。  

qPCR 具有高通量和更宽的动态范围的优点,因为它可以在同一孔内检测广泛的表达水平。由于其多重功能,可以在同一实验中扩增多个目标、高通量和快速结果,因此运行起来更加经济。  

逆转录聚合酶链反应

RT-PCR 是 PCR 的一种,用于从 mRNA 模板分子制备 cDNA。RT-PCR 通常用于检测和定量 RNA 病毒,例如 HIV 和丙型肝炎。

PCR 和 qPCR 都是具有许多不同应用的重要方法。


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用于 PCR 和 qPCR 的设备

有许多不同类型的设备可用于 PCR 和 qPCR。最常见的设备类型是热循环仪 ,它用于加热和冷却样品以使 DNA 扩增发生。

其他常见类型的设备包括逆转录酶、荧光染料或探针以及激光器。根据您的具体应用,您可能还需要其他类型的设备。

PCR 和 qPCR 是许多不同领域中使用的重要方法。通过了解它们之间的主要区别,您可以为您的特定应用选择最佳方法。


结论

总之,PCR 和 qPCR 都是用于扩增 DNA 特定片段的方法

然而,qPCR 是一种实时方法,可让您实时监控目标 DNA 的扩增情况,而 PCR 则不然。最终,这两种方法都可用于生成目标 DNA 序列的多个副本以供进一步分析。

qPCR是核酸扩增、表征、定量和分析的最佳选择。与荧光染料一起使用,非常适合与光学技术一起使用,因此 必须使用 优质透明的尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网:微孔板 和胶片 查看尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网的 qPCR 产品系列 。  

PCR还用于扩增和检测短 DNA 序列,用于后续分析,例如凝胶电泳。微孔板 和胶片不需要透明,因为 PCR 不用于光学应用。

然而,建议选择长期   可靠耐用的 优质微孔板。

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【本文标签】 PCR qPCR 微孔板

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